Настоящий проект направлен на установление степени взаимодействия двух семейств липидов - N-ацилдофаминов и холестерина - при индукции апоптоза в опухолевых клетках и в моделях метастазирования. Каждое из этих семейств обладает описанной цитотоксической или цитостатической активностью в отношении опухолевых клеток и потенциально способно влиять на отдельные стадии метаболизма и передачи сигнала друг друга, однако, существование такого взаимодействия ранее не проверялось. Основная гипотеза данного проекта – это предположение, что цитотоксическая активность NADA в первую очередь направлена на клетки, инициирующие образование опухолей в процессе их зарождения и метастазирования, и эта активность возможна при определенном уровне холестерина в клетке, параметры которого пока неизвестны. Для того, чтобы сигнал от NADA мог запустить внутриклеточные процессы, требуется некий минимальный уровень холестерина, который потом в ответ на этот сигнал повышается и в свою очередь усиливает сигнал. Для проверки данной гипотезы и достижения цели проекта будет изучено взаимное влияние ацилдофаминов и холестерина на их активность и (для холестерина) метаболизм в клеточных моделях цитотоксичности, миграции, метастазирования и с помощью ингибиторного анализа, количественной ОТ-ПЦР и вестерн блоттинга определены ключевые ферменты и компоненты внутриклеточной передачи сигнала, обеспечивающие данное взаимодействие. На последней стадии проекта планируется испытание способности ацилдофаминов влиять на рост перевиваемых опухолей в мышиных моделях. Цель исследования первого этапа проекта - изучить взаимное влияние сигнальных путей N-ацилдофаминов и холестерина. В качестве клеточных моделей использованы линии рака груди человека (MCF-7 и MDA-MB-231) и глиомы C6 крысы.Значения LC50 для амидов дофамина и арахидоновой, докозагексаеновой и олеиновой кислот были в диапазоне 3-40 мкМ для C6, 40-75 мкМ для MCF-7 и 70-90 мкМ для MDA-MB-231 клеток. Для всех клеточных линий базальный уровень холестерина был примерно одинаковым в диапазоне 21-31 нг/мг белка, тогда как уровень активных форм кислорода был выше в клетках MDA-MB-231. Снижение уровня холестерина с помощью метил-бета-циклодекстрина привело к возрастанию значения LC50 values на 10-20 мкМ для клеток MCF-7 и MDA-MB-231 и к драматическому повышению на 96120 мкМ значений LC50 для клеток С6. Повышенная токсичность N-ацилдофаминов положительно коррелирует с наибольшим падением кконцентрации холестерина в клетках после обработки N-ацилдофаминами (-65% в C6 против -20% в MCF-7 и даже повышения на 49% в MDA-MB-231). В отличие от других клеток в линии MCF-7 практически не наблюдается экспрессия генов каннабинодных рецепторов (CB1, VR1 and GPR55), что коррелирует с относительно небольшим увеличением значения LC50 после удаления холестерина (5-10 мкМ против 10-20 в MDA и до 120 мкМ в C6). Таким образом, для цитотоксической активности N-ацилдофаминов требуется определенный уровень холестерина и которая сопровождается снижением концентрации холестерина в клетках.